Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展平稳的过程中逐渐扩展

从第一次借助于现去甲化脓性到借助于现1改型白血病临床副作用的方面率在成年人时期就有很好的描述，多个去甲化脓性乙改型肝炎的成年人中会有70%在血清转换后10年内患白血病，而随访15年的成年人这一分之一上升到84%。相比之下之下，占临床1改型白血病一半以上的改型1改型白血病的中风机制还未得到应有的研究课题。

愈加多的人开始适用应于系统来定义1改型白血病的方面：个体在借助于现多种去甲化脓性时转入第1阶段，借助于现血糖异常时转入第2阶段，借助于现副作用时转入第3阶段。一些多发去甲化脓性乙改型肝炎的个体，在1期和2期，方面较极快，并发展为中风的1改型白血病。我们以前描述了一四组在首次验证到多种去甲化脓性抽样后至寡10年无白血病的极极快方面者，这四组高血压数量寡，但各有不同之处非常明确。随后，我们发掘出去甲自身复合物酪氨酸CD8+T细胞氘加成在方面缓极快的高血压中会基本不存在，但在近期中风和长期存在的白血病高血压中会很容易验证到。这可能表明，与方面高血压相比之下，这些高血压化脓性加成的调节增强。

早期研究课题表明，尽管调节性T细胞氘(Treg)数量正常，但白血病高血压存在一些功用缺陷，其中会包括对IL-2的加成能力也降低。此外，白血病高血压中会的现像CD4+T细胞氘可能对调节颇具抵抗性，表现为现像T细胞氘的减缓减弱，自然产生的Treg和体外产生的诱发Treg，以及复合物境况的CD4+T细胞氘中会IL-2加成减弱。本研究课题的目的是描述了CD4+调节性T细胞氘(Treg)在一小群极缓极快方面者中会的各有不同之处，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

步骤：BOX研究课题是一项以人群为基础的纵向研究课题，在21岁以下确诊的高血压直系亲属中会检查1改型白血病的危险因素所。我们以前描述了长期缓极快方面者的各有不同之处，他们维持多重去甲化脓性乙改型肝炎超过10年，但未借助于现白血病的临床副作用，极快性或非开展性化脓性。随后，10名继续维持无白血病并乐意提供大量血清抽样的缓极快方面者设为T和B细胞氘功用量化。在迄今的研究课题中会，8名极快方面者(SP四组)，中会位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的去甲化脓性乙改型肝炎。所有的参与者都处于1改型白血病方面的1期，尽管一些人随后失去了去甲化脓性对某些复合物的乙改型肝炎加成，然而，一名高血压早就处于2期至寡6年，但未借助于现临床副作用，一名高血压被诊断为白血病，该病患72岁，在采集试验中抽样时，其HbA1c上升时到53 mmol/mol(7%)，在统计学中会对该NADPH开展了实质上评估。分离外周血单个氘细胞氘(PBMCs)，转用多参数流式细胞氘精和T细胞氘减缓试验中评估NADPH中会Treg的增益、性状和功用。适用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)开展无指导聚类量化，评估Treg性状。

结果：与保健NADPH相比之下，来自极快方面体的思绪CD4+T细胞氘的指导聚类说明了，激活的思绪CD4+ Treg增益上升，与糖皮质激素诱发的TNFR相关酶(GITR)表述上升有关。一名HbA1c上升时的高血压与方面缓极快者和匹配的对照四组相比之下，Treg谱大同小异。功用得出结论，与保健NADPH相比之下，来自缓极快方面体的Treg介导的CD4+现像T细胞氘减缓值得注意受损。表现为对现像CD4+T细胞氘CD25和CD134表述的减缓上升。

示意图1 透彻的性状量化说明了，CD4+Treg亚改型在极快方面描述符中会上升。由FlowSOM作用于的Treg室，聚集在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞氘上。根据标明物表述鉴定借助于10个元簇:思绪T细胞氘_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;思绪T cell_4;CD49b思绪T细胞氘;HLA-DR + GITR +思绪T细胞氘;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)适用9个各有不同Treg标明作用于的10个元簇的MST。每个链表都有一个集群(100个集群)，不够大的元集群(10个元集群)在链表四组区域内手绘。每个链表中会的饼示意图回应单个标明的表述级别。(b)每个元聚类的热示意图，以说明了结构上标明表述。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)作用于示意图，以及FlowSOM比对的每个元簇的沙质。(e-l)相对于同位素为每个metacluster罐线示意图(同位素> 0.05%)确定为HD和SP四组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思绪T细胞氘(h)、思绪T cell_1(i),思绪T cell_2 (j),思绪T cell_3 (k) n d CD49b思绪T细胞氘(l)。紫色格子都有**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 适用CITRUS的预测模改型证实，Treg增益的上升是方面缓极快的标志。国际标准门控(a - f)和柑橘量化(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞氘上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会群体的都有性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表述开展分离，模拟FlowSOM社会群体。(b) HD(黑点)和SP(星点)四组以及NADPHSP 606(紫色)中会CD25+ cd127的增益汇总示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控侄集的罐线示意图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述准确度着色，箭头突借助于的簇被比对为SP和HD描述符相互间的各有不同。(j)罐线示意图说明了了在SP(星点)和HD(灰点)四组中会，CITRUS思绪Treg_3和Treg_4的相对于同位素(分之一)。(k)直方示意图说明了每个簇的性状(粉红色)和Treg标明相对于表述与背景表述(蓝色);上列，磁盘Treg_3;下面一行，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中会标明的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图3 与保健献血者相比之下，方面缓极快者思绪treg的GITR上升。每个思绪CD4+T细胞氘元簇(思绪T细胞氘_1;思绪T cell_2;思绪T cell_3;CD49b +思绪T细胞氘;HLA-DR + GITR +思绪T细胞氘;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个表述标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)描述符的表述热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)思绪Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR表述串联，说明了直方示意图(c)和汇总示意图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检验，p< 0.07(紫色)所有NADPH包括，p< 0.05(蓝色)NADPHSP 606和匹配的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR表述，从国际标准门控，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(紫色)串联，说明了直方示意图(e)和汇总示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检验

示意图4 来自缓极快方面的CD4+ treg细胞氘控制现像CD4+T细胞氘的能力也降低。SP四组用蓝色的线和格子回应，HD四组用黑色的线和格子回应，紫色的线/格子回应NADPHsp606。适用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞氘开展分选。CD4+CD25−(转发者)被标明为CFSE, Treg按检视的分之一校准。用抗CD3 /28微珠活化细胞氘，人才3几天后开展流式细胞氘精验证。(a-d)与CD4+转发者相对于应的treg人才(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者人才。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE减缓百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓百分比。适用乙改型肝炎对照(激活的叛离细胞氘不含treg)近似值减缓百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 现像CD4+T细胞氘对缓极快方面的T细胞氘活化的减缓不够敏感。SP四组用蓝色的线和格子回应，HD四组用黑色的线和格子回应，紫色的线/格子回应NADPHsp606。适用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞氘开展分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标明，treg按检视的分之一校准。用抗CD3 /28微珠活化细胞氘，人才3几天后开展流式细胞氘精(CD25反染)和细胞氘因侄量化。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同人才。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE减缓百分率(b)。(c,d) CD25减缓百分率(c)和CD134减缓百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才中会的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差量化。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得借助于的结论是，来自缓极快方面侄的活化思绪CD4+Treg在GITR表述中会得到了扩展和丰富多彩，重申了有利于研究课题Treg在1改型白血病高风险个体中会的异质性的必要性。

文中借助于处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28